Bei der Proteinrenaturierung muss das Einschlusskörperprotein zunächst aufgelöst werden. Einschlusskörperprotein bezieht sich auf die Aggregation von Proteinen, die von Bakterien in Zellen exprimiert werden, um inaktive feste Partikel zu bilden, die amorph und wasserunlöslich sind und sich nur in Denaturierungsmitteln wie Harnstoff undGuanidinhydrochlorid.

Danach wird das Denaturierungsmittel langsam entfernt, um das Zielprotein aus dem denaturierten vollständig gestreckten Zustand in die normal gefaltete Struktur wiederherzustellen, während das Reduktionsmittel entfernt wird, um die normale Bildung von Disulfidbindungen zu ermöglichen. Im Allgemeinen ist der Renaturierungsprozess vonGuanidinhydrochloridbeginnt bei 4M und endet bei 1,5M. Es gibt verschiedene Methoden:

Verdünnung und Rückfaltung: Geben Sie direkt Wasser oder Puffer hinzu, um die Lösung zu verdünnen, und lassen Sie sie über Nacht stehen, damit das Protein ausfällt. Der Nachteil besteht darin, dass das Volumen stark ansteigt, die Verdünnungsgeschwindigkeit des Denaturierungsmittels zu hoch ist und es schwer zu kontrollieren ist; Dialyse oder Ultrafiltration Rückfaltung: beide Denaturierungsmittel Kleinmolekulare Substanzen können während der Dialyse oder Ultrafiltration allmählich die poröse Membran durchdringen, so dass die Denaturierungsmittelkonzentration der denaturierten Proteinlösung allmählich reduziert und schließlich entfernt wird, sodass das denaturierte Protein gefaltet und umgefaltet wird. Der Vorteil ist, dass die Lautstärke nicht erhöht wird. Die Entfernungsrate des Denaturierungsmittels wird durch allmähliche Verringerung der Konzentration des externen Permeats gesteuert, aber das Verfahren ist langsam und zeitaufwendig; On-Column-Renaturierung: Die Renaturierung wird durch das chromatographische Verfahren erreicht, das kürzlich untersucht und erfolgreich durchgeführt wurde. Ein Umfaltverfahren, das in der Produktion verwendet wird. Der Vorteil besteht darin, dass die Adsorptionskapazität der chromatographischen Fixierung im Vergleich zum denaturierten Protein relativ gering ist, was die Qualität der Rückfaltung und die Aktivitätsausbeute verbessern kann; gleichzeitig kann es auch das Zielprotein und das Verunreinigungsprotein trennen, um den Zweck der Reinigung zu erreichen; und es ist bequem, das Denaturierungsmittel zurückzugewinnen.

Protein ist ein biologisches Makromolekül, das mit dem Leben in Verbindung steht, eine unverzichtbare Substanz, um den normalen Lebensverlauf aufrechtzuerhalten, und es ist auch der Code der zweiten Generation des Lebenserbes. Auch verschiedene Forschungen zum Protein sind für den Menschen von größerem Interesse, und die Erforschung seiner Struktur ist auch für den Fortschritt der Medizin von großer Bedeutung. Die Denaturierung oder Renaturierung von Proteinen ist eines der Kernthemen der Life-Science-Forschung. Unter ihnen das VergällungsmittelGuanidinhydrochloridkann das Protein nicht nur denaturieren, das Studium seiner Struktur erleichtern, sondern auch das Einschlusskörperprotein während des Renaturierungsprozesses auflösen. Spielte eine wesentliche Rolle in der Forschung.